做实验一直失败是种什么感受？
说一下我的感受吧
比起不明原因的成功，我觉得不明原因的失败更能让我振作一点，因为失败是有必然的原因的，如果是乌龙原因那打回重做，不是乌龙就一点点摸索和排除。莫名其妙的成功我反正是心里没底的。我更喜欢失败了之后找到失败的原因然后一点点摸索着成功，一蹴而就的话就没啥意思了。
截止到昨天，我做了六次wb预实验，尽管大家都很开心，因为膜上终于有蛋白条带了，还挺好看，但是我们没有完完整整的成功过。昨天没有再往下做，因为一抗被我们用光了，GAPDH也用掉了，老师说再找别的老师蹭点试用装，不然真的做不起。。。
我们一直失败把老师都弄懵了，查了好多资料，问了很多老师，都很懵，前几次因为各种乌龙，后面始终不明白为什么膜上没有蛋白条带，在marker转的特别漂亮的情况下。老师也着急，我们情绪也不高，只能一点点排除，前几次摸索失败原因记不清了，说说最近一次的:
我们本来想做一遍完整的预实验，做了三块胶，电泳之后一块胶用来考染，两块用来电转，胶上条带非常清楚漂亮，我们放心大胆往下做，结果电转完一块用来继续做，一块用丽春红染的时候发现染色的膜上除了整整齐齐漂漂亮亮的marker啥也没有，这时候就有点不详的预感~在要加封闭液加一抗的时候我傻眼了:之前试剂放在一个袋子里扔进冰箱冷藏室了，但是里面的一抗二抗没有拿出来单独放。一抗二抗都是标明-20度冷冻保存，已经被我们冷藏放了半个多月了，只能硬着头皮用，正常是37度孵育一小时或者4度摇床一夜，太晚了考虑到要休息就选择摇床过夜，然鹅我们没有4度的条件，又怕夜里冰化了都是水晃得到处都是，只好少放点冰摇了一夜，这两波骚操作直接导致了我们第二天显影啥都没有，我拿出显影剂的时候同组小伙伴恍然大悟，想起上上次失败的原因了，说她上次只加了DAB的溶液，然而试剂盒给了一瓶溶液五小瓶干粉，用的时候要放一小瓶干粉的。。。所以结果依然是什么都没有的，直到老师找学校其他院系的外援，综合了我们大晚上灵机一动的想法(用光的一抗和内参蛋白用离心机甩出来一丢丢，加水稀释十倍测蛋白浓度)，内参是2.08，一抗是0.5。内参的膜做不出来是因为常温摇床可能目标蛋白降解了，另外一个丽春红染的膜没出来是一抗失效了。
综合起来我们失败有几个原因，一抗肯定失效了，除此之外电转液的配方有问题，我们直接用的上海生工的转膜混合物加200ml甲醇定容到1000ml，但外援一直用的都是自己配的，没有SDS的配方，而且电转的条件我们用的200mA一小时，他们用的360mA一小时。但由于一抗没有了所以我们昨天重新做，只做到电转后用丽春红染，最后终于出了蛋白条带，我们开开心心回去休息，准备下周杀老鼠制备样品。
我觉得失败是不可怕的，只要认真做，认真找原因，就问心无愧的。哪有人总成功的，态度端正，每个步骤都认真做，有伙伴就互相监督着做，就算总失败也不是总在一个步骤上失败吧，坚持下去总能成功的。
